皇家赌船讲述了警方一批枪械失踪后，飞虎队简sir（冯淬帆饰）遭到上级严厉斥责，并被命令重新组建和训练霸王花。与此同时，他与吴长官（胡慧中饰）的婚后生活也仿佛持续接受特训，家中悬挂的“霸王花之家”牌匾更让他每日都心神不宁。
简sir和忠心耿耿的下属阿南（楼南光饰）将接连不断的烦恼迁怒于重新集合受训的五名霸王花，企图把她们全部淘汰，以挽回飞虎队的颜面。没想到阿南却暗中与Susana（叶子楣饰）、May（惠英红饰）、Amy（吴君如饰）等五名队员合作，反过来摆了简sir一道。五名霸王花各具专长，最终全员通过简sir安排的地狱式训练，并开始执行卧底任务。此次，她们将登上赌船，调查日本、台湾和马来西亚三地赌界高手挑战赌王事件背后的真相。
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